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Biuret法的蛋白质含量测定方法描述

添加时间:2023-11-17 17:00:43   浏览次数:464  

Biuret法是一种常用的蛋白质含量测定方法,通过其与蛋白质结合产生的颜色反应来测定蛋白质的含量。

样品制备:首先,需要将待测的蛋白质样品制备成适当的溶液。通常情况下,将蛋白质溶解在适当的缓冲液中,以确保反应的稳定性和准确性。

加入试剂:将样品溶液加入到含有Biuret试剂的试管或反应皿中。Biuret试剂通常由碱性铜溶液和钠钾氢氧化物组成。

反应产生:当蛋白质与Biuret试剂反应时,会产生紫色的络合物。这是因为蛋白质中的蛋白质质量大约为200个氨基酸残基,而Biuret试剂中的铜离子与蛋白质中的两个或更多的肽键结合形成络合物,从而产生紫色的化合物。

测定吸光度:将反应产物的吸光度测定在特定波长下,通常在540nm左右。吸光度与蛋白质的浓度成正比,因此可以通过吸光度的测定来间接测定蛋白质的含量。

对照标准曲线:为了确定样品中蛋白质的含量,通常需要制备一系列已知浓度的蛋白质标准溶液,测定它们的吸光度,并绘制标准曲线。然后,将待测样品的吸光度与标准曲线进行比较,从而确定样品中蛋白质的含量。

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